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茎环引物及荧光定量PCR引物
发布日期:2022-04-28     浏览次数:13
核心提示:1.2.1 乾华肉用美利奴羊皮肤毛囊总RNA的提取按照TaKaRa Trizol说明书提供的RNA提取方法操作,提取次级毛囊不同发育时期的乾华肉用美利奴羊肩胛部皮肤
 

1.2.1  乾华肉用美利奴羊皮肤毛囊总RNA的提取    按照TaKaRa Trizol说明书提供的RNA提取方法操作,提取次级毛囊不同发育时期的乾华肉用美利奴羊肩胛部皮肤组织的总RNA,用Agilent2100检测总RNA质量,将检测合格的次级毛囊生长期、退行期和休止期的5个重复样品总RNA等量混合。

1.2.2  高通量测序    采用HiSeq-2500 SE50测序仪对样品进行高通量测序。

1.2.3  高通量测序结果验证    采用primer primer5.0设计miR-1249-3p、miR-1-3p、miR-3019、miR-19a-3p和miR-4763-5p等5个miRNA的茎环引物及荧光定量PCR引物,运用miRNA通用反向引物(序列:ATCCAGTGCAGGGTCCGAGG)及U6作为荧光定量PCR内参,检测5个miRNA在次级毛囊不同发育时期的相对表达量,以期对高通量测序结果进行验证。所需引物由上海生工生物工程有限公司负责合成。

 
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